结直肠癌筛查 / 辅助诊断 IVD 试剂临床试验：样本采集时序管控要点

        针对用于结直肠癌筛查、辅助诊断的体外诊断试剂，临床试验大多采用结肠镜检查结果作为金标准开展比对研究。结肠镜属于侵入性检查，镜下活检、黏膜擦拭、肠道充气、肠道预处理等操作，会直接改变肠道局部微环境，引起血液、粪便当中目标检测物浓度波动，带来系统偏倚，影响临床试验结论可靠性。因此样本采集时机、和肠镜的时间间隔，是该品类临床试验设计里非常关键的控制要素。本文围绕审评要求，梳理样本采集时序规则、管控逻辑、实操边界以及方案设计注意事项。

一、核心时序原则：样本采集必须安排在结肠镜之前

        结肠镜操作本身会对肠道黏膜造成扰动，如果先做肠镜，再采集粪便、血浆等试验样本，活检、黏膜损伤、出血、肠道冲洗等操作，会造成肿瘤相关标志物、突变核酸、甲基化靶点浓度异常升高或者波动，无法代表受试者自然状态下的基线水平。 这种由检查操作带来的指标变化，不是受试者本身疾病状态的真实反映，会直接造成试验试剂阳性检出率、灵敏度、特异度结果失真，形成无法接受的试验偏倚。 因此审评明确要求：用于比对研究的临床试验样本，无论是粪便样本，还是外周血浆样本，都必须在结肠镜检查实施之前完成采集。不允许采用肠镜之后采集的样本作为和肠镜结果配对的试验样本。

二、样本采集与结肠镜检查的时间间隔控制

        为保证试剂检测结果与结肠镜诊断结论具备可比性，减少受试者在窗口期内病情进展带来的混杂因素，样本采集完成至结肠镜检查的间隔，建议不超过 12 周。 设置该时限的底层逻辑：结直肠癌、高级别上皮内瘤变等病变在短期内快速进展的概率相对可控，在 12 周窗口期内，可以认为受试者的病变状态保持稳定，试剂检测结果和肠镜最终判定的疾病状态可以相互对应；如果间隔过长，受试者可能在窗口期内出现新发病变、息肉进展、病变消退等情况，造成 “样本检测时的身体状态” 和 “肠镜检查看到的状态” 不一致，直接破坏配对比对的试验基础。

        在方案设计时，应当在纳入排除标准、访视流程中写明时间窗口要求，同步在病例记录表（CRF）中记录两个关键时间点：样本采集日期、结肠镜检查日期，便于后续稽查、统计和审评核查。对于超出 12 周的病例，一般需要预先设定剔除规则，不纳入符合方案集（PPS）。

三、不同样本类型的附加采集注意事项

1. 粪便样本 粪便类甲基化、粪便隐血、粪便多靶点检测试剂是结直肠癌筛查主流品类。除时序要求之外，还需要规范肠道准备顺序：不能提前使用肠镜专用清肠药物之后再采集基线粪便样本；清肠会稀释、冲刷肠道内容物，同样会干扰靶标浓度。粪便采集完成之后，再安排肠道准备以及后续结肠镜。同时严格执行样本保存、转运、核酸稳定处理流程，避免靶标降解。
2. 血浆样本（血液无创检测） 血浆样本虽然不直接接触肠道创面，但同样遵循 “采血在前、肠镜在后”。肠镜操作带来应激、局部出血、炎症因子释放，也会影响循环中游离肿瘤 DNA、标志物水平。采血同样纳入 12 周间隔管控；同时注意采血前的空腹要求、溶血管控，避免样本前处理引入额外误差。

四、临床试验方案设计与偏倚防控落地建议

        第一，在临床试验方案的设计部分，专门设置样本采集章节，清晰写明先后顺序、最大时间间隔 12 周的要求，同时说明设置该限制的风险控制理由，便于伦理审查和后续审评。

        第二，对研究者开展培训，明确禁止反向采样；在入组筛选流程上固化顺序：知情同意 → 基线样本采集 → 安排肠镜预约，而不是先预约肠镜再回头补采样本。

        第三，做好时间记录溯源，每个配对病例保留采样时间、肠镜实施时间，监查员重点核查该条目，作为监查核心核查项。

        第四，提前预设方案偏离的处理规则：如果发生先肠镜后采样，直接判定为重大方案偏离，该病例剔除；采样与肠镜间隔超过 12 周的病例，也预先划定为方案偏离，不进入主要有效性分析集。

        第五，在统计分析计划中，说明时间窗口作为分层核查因素，必要时做敏感性分析，对比短间隔（例如 4 周内）和接近 12 周的病例结果是否存在明显差异，论证时间窗口设置的合理性。

五、高频误区汇总

        误区一：认为血浆样本不受肠镜操作影响，可以肠镜之后采血。实际上黏膜损伤、应激反应会改变循环靶标水平，同样会引入偏倚，必须统一遵守时序要求。

        误区二：只记录采样日期，不核对间隔，认为只要在几个月之内就可以，忽略 12 周上限。

        误区三：将肠镜活检组织样本、术后样本和筛查基线样本混为一谈。活检组织本身是肠镜操作产物，不能作为基线筛查样本使用。

        误区四：方案里没有写明该控制要求，等到核查阶段才发现大量病例采样时序颠倒，造成整个临床试验数据不被认可，试验返工。

六、小结

        以结肠镜作为参比标准的结直肠癌筛查、辅助诊断 IVD 试剂临床试验，基线粪便、血浆样本必须在结肠镜检查之前采集；样本采集至结肠镜检查的间隔建议不超过 12 周，以此规避肠镜侵入操作带来的靶标浓度干扰，降低疾病状态随时间改变造成的偏倚，保障比对研究数据科学可靠。